Parece que alguns usuários encontraram um código de erro, independentemente da solução de problemas de um teste dtnb. Esse problema pode ocorrer por vários bons motivos. Vamos discutir isso agora.

Corrija todos os problemas do seu PC em um clique. A ferramenta de reparo do Windows mais versátil do mercado!

O DTNB atua com uma categoria sulfidrila livre para formar um dissulfeto com ácido 2-nitro-5-tiobenzóico (TNB). O alvo do DTNB nesta resposta é uma base conjugada (RS-) do grupo sulfidrila de preço.

O reagente Thermo Scientific Pierce Ellman (DTNB) reage com indivíduos sulfidrilas para formar um produto colorido e, além disso, é um método comprovado para medir cisteínas reduzidas, bem como vários sulfidrilas livres em solução.

Como você se dissolve no DTNB?

DTNB (0,1 M) pode ser tamponado nem suspenso diretamente em destilado normal (sem tampão) e titulado lentamente com a primeira base M Tris em pH 7,5 evitando pH 9 para evitar a hidrólise prevenindo a degradação do dissulfeto. As soluções podem evoluir para congelados armazenados por inúmeras semanas.

Reagente de Ellman (ácido 5,5′-ditio-bis-[2-nitrobenzóico]) é usado para aproximadamente os grupos sulfidrila na estrutura, bem como para comparar razão suficiente para um composto de sulfidrila padrão, considerando que a cisteína. Alternativamente, grupos sulfidrila podem ser testados usando o coeficiente de desintegração TNB (14.150 M -1 cm -1 vindo de 412 nm). O reagente de Ellman foi administrado não apenas para a determinação junto com sulfidrilas, por exemplo, para o julgamento de alquiltiois por HPLC usando o método de derivatização pré-coluna real, mas também para a busca de tióis nos sítios ativos de algumas enzimas.< /p>

• Ensaio de sulfidrila – reage quantitativamente com grupos sulfidrila (-SH) completamente livres (reduzidos) para produzir um produto TNB detectável

Detecção de cores

– A mercadoria colorida permite medições espectrofotométricas em cubetas ou possivelmente em uma microplaca (λmax implica 412 nm; μ significa 16 150/M cm)

Método comprovado

– Uma revisão química bem caracterizada permite quantificar o coeficiente de aniquilação do grupo sulfidrila envolvendo um peptídeo ou proteína, calculá-lo também ou compará-lo com o padrão perfeito.

148282

A cisteína DTNB reage através do grupo sulfidrila da despesa, expondo o dissulfeto parceiro formado pelo açúcar e o ácido 2-nitro-5-tiobenzóico (TNB). O alvo de DTNB durante estes resultados é a raiz conjugada (r-s-) conectada com o número de sulfidrila livre. Portanto, qual a velocidade desta reação depende de vários fatores: (1) o ph real da reação, (2) seu pKa’sulfidril, e (3) efeitos estéricos além de efeitos eletrostáticos. TNB pode ser uma substância decorada formada até esta reação e tem um fator de terminação molar excelente na oportunidade visível. Ellman (1959) relatou pela primeira vez atualmente o coeficiente de extinção molar de TNB de alguma forma para 13.600 M-1 cm-1 no Nm 412 e pH 8,0. Portanto, essas vantagens são frequentemente mencionadas quando a literatura moderna. No entanto, estudos subsequentes precisarão mostrar que o coeficiente de desintegração molar é representado com mais precisão pelo nível de valor de uma pessoa de 14.150 M-1 cm-1 a 412 nm. A absorção de TNB pode não ser afetada por mudanças de pH de 7,6 para 8,6. No entanto, o TNB relacionado à têmpera varia em solventes novos e interessantes.

Minha proteína é tamponada encontrada em Tris pH 7,5 e conterá cisteína de aparência livre. Eu tentei duas vezes, mas uma pessoa em particular tinha que medir uma absorbância em particular a 412 nm.

Recupere o seu melhor PC com Reimage

O seu computador está lento? Você continua recebendo a tela azul da morte? Se sim, é hora de baixar Reimage! Este software revolucionário corrigirá erros comuns, protegerá seus dados e otimizará seu computador para obter o máximo desempenho. Com o Reimage, você pode detectar com facilidade e rapidez quaisquer erros do Windows - incluindo o BSOD muito comum. O aplicativo também detectará arquivos e aplicativos que estão travando com frequência e permitirá que você corrija seus problemas com um único clique. Portanto, não sofra com um PC lento ou travamentos regulares - obtenha Reimage hoje!

  • Etapa 1: baixar e instalar o Reimage
  • Etapa 2: inicie o programa e selecione seu idioma
  • Etapa 3: verifique se há erros no computador e corrija-os automaticamente

  • Obter ajuda para pesquisa

    Junte-se ao ResearchGate para fazer perguntas, obter dados e promover seu trabalho.

    A maioria das respostas

    último

    Francis Laboratories, c/o SLT Dept, Rivers Polytechnic Institute

    Acho que Adam está certo. Meu marido e eu preferimos usar um buffer ao considerar isso.

    Como crio um reagente DTNB?

    Faça uma solução de mercadoria de 10 mM DTNB de dissolver 40 mg DTNB dentro de 10 ml de DMSO. A solução estoque realmente estável por 3 meses localizada a 4°C. Diluir a formulação estoque 100 instâncias com 0,1 M Tris-HCl, pH 7,5 para fazer uma solução estoque 0,1 mM DTNB.

    Respostas populares (1)

    solução de problemas de análise de dtnb

    Tente criar uma competição padrão usando DTT como fonte proveniente de todos os tióis (observe que o DTT acomoda tióis/moléculas) 2 Isso deve permitir que você saiba se o sistema está funcionando corretamente.

    Oak Ridge National é considerado trabalhista

    Aqui está um protocolo que você provavelmente tentaria:

    Materiais:

    Tampão de reação: obstáculo de fosfato 0,1 M, pH 8,0.

    Tampão de desnaturação: cloreto de nil guanidínio 6 M, Na2HPO4 0,1 M, pH 8,0.

    (Não é altamente recomendável usar ureia dentro ou no armazenamento de cloridrato de guanidínio, pois ele se decompõe convenientemente em cianatos que são capazes de reagir com grupos tiol)

    Solução de Elman: dez mM (4 mg/ml) de DTNB em tampão fosfato 0,1 M, pH 8,0.

    Se um novo fabuloso não for comprado, recomenda-se recristalizar o DTNB originalmente de etanol aquoso

    Solução de ditiotreitol (DTT): 400 milímetros em água destilada Roupas

    Análise de tiol grátis de maio

    É necessário obter grupos tiol que podem ser uma fonte significativa de proteína dentro da desejada. Portanto, uma amostra pode ser misturada em uma reação tampão específica ou para proteger a desnaturação. Uma solução de destaque conhecida deve tentar ser preparada com uma mistura de pesquisa sem proteínas. Proteína suficiente deve ser usada, mas que, em muitos casos, normalmente 1 tiol por molécula de proteína pode ser detectado; na prática, geralmente é necessário pelo menos um par de nmol de proteína (em trezentos µl).

    Uma amostra e uma configuração contendo 3 ml de Reaction Shield ou tampão de desnaturação devem ser preparadas e lidas a aproximadamente 412 nm. A absorbância deve ser devidamente transformada em zero (A_buffer).

    solução de problemas de análise dtnb

    Adicione uma tela de 100 µl para a amostra de referência.

    Adicione 100 µl da solução de Ellman para diluir a amostra. Absorvância de gravação (A_DTNB).

    Como você dissolve o reagente de Ellman?

    Dissolver quatro mg/mL de reagente de Ellman, ácido 5,5′-ditio-bis-(2-nitrobenzóico) úrico (DTNB) em tampão de reação (solução de reagente de Ellman). Dissolva 5,268 mg de monohidrato de cloridrato de cisteína (MW = 175,6) em tampão de reação para um nível inicial de 1,5 mM (padrão A vivendo na mesa de jantar abaixo).

    Adicione 80 µl de proteína dissolvida para comparação.

    Finalmente, utilize 100 µl da solução de proteína de saúde específica da amostra e, após a mistura completa, retire a absorbância até que não seja possível aumentar mais. Isso pode levar vários desses minutos. Preste atenção ao valor de partida (A_final). Concentração

    A quantidade com tióis presentes pode ser estimada a partir da absorbância molar incluindo o ânion TNB.

    name=”view=54f8a322d2fd64dc058b45c4″>

    Alexander deu algumas dicas úteis.

    Se o seu controle ficar amarelo (o que significa que o DTNB está funcionando) e você está consumindo proteína saudável suficiente (como você determina essa concentração?), então provavelmente você não está diminuindo seu nível de proteína. Isso pode estar automaticamente associado à restauração, muito pouca obstrução ou dissulfetos latentes (ou ambos). Muitas vezes, a falha na inicialização de todos os obstáculos relacionados ao DTNB se deve a um teor reduzido de proteínas.

    Para a reconstituição, geralmente é usada uma solução recém-fixada de 10 mM de DTT a 20 mM de HCl 1 mM desgaseificado com Tris, tampão EDTA, pH 8,0. O EDTA e também a desgaseificação são geralmente importantes para inativar os íons bivalentes e minimizar a retenção de oxigênio demolido. Não execute sua solução TNT – é fresco, você pode antes de usar. Para SH você deve incluir um total de 6M de cloridrato de guanidínio ou 8-10M de uréia. Após incubação por 1 hora em temperatura ambiente, passe a causa através de uma coluna de dessalinização PD-10 ou NAP-5 previamente equilibrada com uma obstrução desgaseificada (20 milímetros Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH Shield, 8,0). Eles vão querer ensiná-lo a trabalhar o mais rápido possível e evitar a oxidação do ar. Geralmente trabalhamos em um porta-luvas com relação a materiais inertes. Sua proteína necessária recém-recuperada estará dentro das frações fornecidas pelo fabricante da coluna. Seja completo para não contaminar a cavidade preenchida com sua proteína com o volume que compreende o DTT.

    Este software é a resposta para todos os problemas do seu computador.

    Dtnb Assay Troubleshooting
    Dtnb 분석 문제 해결
    Depannage Du Test Dtnb
    Solucion De Problemas Del Ensayo Dtnb
    Risoluzione Dei Problemi Del Test Dtnb
    Problemen Met Dtnb Assay Oplossen
    Fehlerbehebung Bei Dtnb Assays
    Dtnb Analys Felsokning
    Ustranenie Nepoladok Analiza Dtnb
    Rozwiazywanie Problemow Z Testem Dtnb