Parece que algunas personas han encontrado un código de error durante el tiempo solución de problemas de un dtnb pequeña muestra. Este problema puede ocurrir por varias de estas razones. Hablemos de esto ahora.

Solucione todos los problemas de su PC con un solo clic. ¡La herramienta de reparación de Windows más versátil del mercado!

DTNB reacciona con un grupo sulfhidrilo libre para formar un disulfuro, además de ácido 2-nitro-5-tiobenzoico (TNB). El DTNB asociado al objetivo en esta respuesta es una base conjugada particular (RS-) del grupo sulfhidrilo de carga.

El reactivo de Thermo Scientific Pierce Ellman (DTNB) reacciona con grupos sulfhidrilos para formar una sustancia coloreada y es un método probado cuando se considera medir cisteínas reducidas, así como otros sulfhidrilos libres en solución.

¿Cómo se disuelve para DTNB?

El DTNB (0,1 M) puede tamponarse o suspenderse directamente en fluido destilado (sin tampón) y titularse lentamente ahora con base Tris 1 M a pH 7,5 evitando pH 9 para evitar la hidrólisis y evitar la degradación del disulfuro. Las soluciones pueden potencialmente almacenarse congeladas durante muchas semanas.

El reactivo de Ellman (5,5′-ditio-bis-[ácido 2-nitrobenzoico]) se usa para aproximar los grupos sulfhidrilo en una muestra, así como comprar con un compuesto de sulfhidrilo estándar como la cisteína. Alternativamente, los grupos sulfhidrilo se probarán usando el coeficiente de desintegración TNB (14,150 M -1 cm -una persona a 412 nm). El reactivo de Ellman podría haber sido utilizado no solo para la conducción de sulfhidrilos, por ejemplo, para todas las determinaciones de alquiltioles mediante HPLC practicando el método de derivatización precolumna, sino también para la búsqueda de tioles que operan en los sitios activos de una cantidad de enzimas. .

• Ensayo de sulfhidrilo: reacciona cuantitativamente y libera (reducidos) grupos sulfhidrilo (-SH) y proporciona un producto TNB detectable

Detección de color

– El equipo de color permite mediciones espectrofotométricas como parte de cubetas o posiblemente en una microplaca (λmax equivale a 412 nm; μ significa 10 150/M cm)

Método probado

– Un análisis de solución bien caracterizado permite cuantificar el coeficiente de extinción general de la asociación sulfhidrilo de un péptido o proteína, estimarlo o compararlo con cada estándar.

148282

La cisteína DTNB reacciona a través del grupo sulfhidrilo libre exacto, exponiendo este disulfuro mixto formado por azúcar y ácido estomacal 2-nitro-5-tiobenzoico (TNB). El objetivo de DTNB durante tal reacción son las raíces conjugadas (r-s-) del número de sulfhidrilo libre. Por lo tanto, la velocidad de esta reacción varía según varios factores: (1) el pH final de la reacción, (2) este pKa’ sulfhidrilo específico y (3) síntomas estéricos además de los efectos electrostáticos. TNB es una sustancia decorada formada que se encuentra en esta reacción y tiene un factor de terminación molar de primera clase en el rango claro. Ellman (1959) informó por primera vez el coeficiente de extinción molar exacto de TNB en el camino a 13.600 M-1 cm-1 a Nm 412 y pH 8,0. Por lo tanto, estas ventajas se mencionan a menudo en la literatura moderna. Sin embargo, proyectos de investigación posteriores han demostrado que entonces el coeficiente de terminación molar se representa con mayor precisión debido al nivel de valor de 14.150 M-1 cm-1 a 412 nm. La retención de TNB puede no verse afectada por cambios en el pH de 7,6 a 8,6. Sin embargo, el TNB relacionado con la extinción varía según los diferentes disolventes.

Mi proteína se puede amortiguar en Tris pH 7,5 y proporciona cisteína de apariencia libre. Lo intenté dos veces, afortunadamente una persona tuvo que medir cada una de nuestras absorbancias a 412 nm.

Haga que su PC vuelva a su mejor estado con Reimage

¿Tu computadora funciona lentamente? ¿Sigues recibiendo la pantalla azul de la muerte? Si es así, ¡es hora de descargar Reimage! Este software revolucionario corregirá errores comunes, protegerá sus datos y optimizará su computadora para un rendimiento máximo. Con Reimage, puede detectar fácil y rápidamente cualquier error de Windows, incluido el BSOD demasiado común. La aplicación también detectará archivos y aplicaciones que fallan con frecuencia y le permitirá solucionar sus problemas con un solo clic. Así que no sufra una PC lenta o fallas regulares: ¡obtenga Reimage hoy!

  • Paso 1: Descargue e instale Reimage
  • Paso 2: Inicie el programa y seleccione su idioma
  • Paso 3: Analice su computadora en busca de errores y corríjalos automáticamente


  • Obtener ayuda de investigación

    Únase a ResearchGate para pedir puntos, obtener datos y promocionar su propio trabajo.

    Más respuestas

    última

    Francis Laboratories, c/o Departamento SLT, Instituto Politécnico de Rivers

    Tengo razones para creer que Adam tiene razón. Mi esposo sin mencionar que prefiero usar una barrera para esto.

    ¿Qué tan definitivamente puedo crear un reactivo DTNB?

    Haga una solución madre importante de DTNB 10 mM disolviendo 40 mg de DTNB en los últimos 10 ml de DMSO. La respuesta del stock es estable por 3 meses ubicado a 4°C. Diluya la formulación madre cientos de veces con Tris-HCl 0,1 M, ph 7,5 para hacer una solución madre de DTNB de 0,1 milímetros.

    Respuestas populares (1)

    solución de problemas del ensayo dtnb

    Intente construir una curva de ejecución del molino usando DTT como una ubicación de tioles (tenga en cuenta que DTT ofrece tioles/moléculas) 2 Esto debería permitirle saber si el sistema está transportando correctamente.

    Oak Ridge National es trabajo

    Este es un protocolo que su empresa podría probar:

    Materiales:

    Tampón de reacción: tampón de fosfato 0,1 M, pH 8,0.

    Tampón de desnaturalización: cloruro de guanidinio nilo 6 M, Na2HPO4 0,1 M, pH 8,0.

    (No es preferible usar urea dentro o en lugar del clorhidrato de guanidinio, ya que se descompone fácilmente en cianatos que pueden reaccionar con los grupos tiol)

    Plan de Elman: DTNB 10 mM (4 mg/ml) de nuevo tampón fosfato 0,1 M, ph 8,0.

    Si no se vendió uno nuevo, se recomienda recristalizar DTNB a partir de etanol acuoso

    Solución de ditiotreitol (DTT): 450 mM en agua destilada Ropa

    Análisis de tioles libres de May

    Es necesario para que introduzca grupos tiol que efectivamente puedan ser capturados dentro de la proteína deseada. Por lo tanto, la muestra se puede volver a mezclar en una reacción tampón o para inhibir la desnaturalización. Se puede preparar una solución de resaltado conocida con una mezcla familiar sin proteínas. Debe poseerse previamente suficiente proteína para que, en muchos casos, normalmente se detecte definitivamente un tiol por molécula de proteína; en la práctica, normalmente se requiere un mínimo de 2 nmol de proteína (en 230 µl).

    Una muestra combinada con un plan que contenga 3 ml de Reaction Shield o tampón de desnaturalización debería terminar tal como se preparó y leer hasta 412 nm. La absorbancia debe estar bien ajustada a cero (A_buffer).

    solución de problemas del ensayo dtnb

    Añadir 100 µl presentes a la muestra de referencia.

    Agregue cien µl de solución de Ellman para diluir actualmente la muestra. Escriba absorbancia (A_DTNB).

    ¿Cómo se disuelve el Reactivo de Ellman?

    Disolver 4 mg/ml del reactivo de Ellman, 5,5′-ditio-bis-(2-nitrobenzoico) químico (DTNB) en la barrera de reacción (solución de reactivo de Ellman). Disuelva 5,268 mg con monohidrato de clorhidrato de cisteína (MW = 175,6) en tampón de reacción hasta una concentración muy de 1,5 mM (estándar A en la tabla de comedor a continuación).

    Añadir cien µl de proteína disuelta con fines comparativos.

    Finalmente, use 100 µl de toda la solución de proteína específica de la muestra y, después de unirlos bien, elimine la absorbancia hasta que no sea posible un aumento. Esto puede aceptar varios minutos. Fíjate indiscutiblemente en el valor restante (A_final). Concentración

    La cantidad de tioles presentes puede ser una distancia mayor calculada a partir de la absorbancia molar, incluido algo de anión TNB.

    < /div>

    name=”view=54f8a322d2fd64dc058b45c4″>

    Alexander mostró algunos consejos útiles.

    Si su estar a cargo se vuelve amarillo (lo que significa que DTNB funciona normalmente) y está consumiendo una cantidad satisfactoria de proteína (¿cómo determina su concentración?), entonces lo más probable es que no esté bajando su proteína nivel. Esto puede asociarse automáticamente con la cicatrización, una obstrucción insuficiente o disulfuros latentes (o ambos). Muy a menudo, la falta de respuesta directa a todos los obstáculos relacionados con DTNB se debe definitivamente a un contenido necesario reducido.

    Para la reconstitución, normalmente usamos una solución recientemente preparada de DTT 10 mM en 1 milímetro de HCl desgasificado con Tris 20 mM, tampón EDTA, pH 8.0. El EDTA y la desgasificación son generalmente importantes para inactivar los iones divalentes y minimizar la retención de oxígeno disuelto. No ejecute su increíble solución TNT: está claro justo antes de usar. Para SH, el público debe incluir un total junto con 6M de clorhidrato de guanidinio o 8-10M de urea. Después de la incubación durante 1 hora a temperatura ambiente, pase la causa a través de la columna de desalinización PD-10 o NAP-5 derecha previamente equilibrada con una congestión desgasificada (20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, tampón de ph, 8,0). Querrán ayudarlo a trabajar lo más rápido posible y evitar la oxidación del aire. Por lo general, trabajamos en una guantera que tiene materiales inertes circundantes. Su proteína recién traída estará dentro de las partes esperadas por el fabricante de la columna. Tenga cuidado de no contaminar el orificio que contiene su proteína con el nivel que contiene DTT.

    Este software es la respuesta a todos sus problemas informáticos.

    Dtnb Assay Troubleshooting
    Dtnb 분석 문제 해결
    Depannage Du Test Dtnb
    Solucao De Problemas Do Ensaio Dtnb
    Risoluzione Dei Problemi Del Test Dtnb
    Problemen Met Dtnb Assay Oplossen
    Fehlerbehebung Bei Dtnb Assays
    Dtnb Analys Felsokning
    Ustranenie Nepoladok Analiza Dtnb
    Rozwiazywanie Problemow Z Testem Dtnb